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摘要:本研究利用微流控電穿孔儀實現了對單細胞的精準基因編輯,通過優化實驗條件,成功提高了基因編輯效率,為單細胞水平上的基因功能研究和疾病模型構建提供了強有力的工具。本文詳細闡述了實驗方法、結果及討論,并展望了該技術的創新應用前景。一、引言基因編輯技術,特別是CRISPR/Cas9系統的出現,極大地推動了生命科學領域的研究進展。然而,傳統的基因編輯方法通常針對細胞群體進行操作,難以實現對單個細胞的精準編輯。近年來,微流控技術的發展為單細胞操作提供了可能,其中微流控電穿孔儀作為一...
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摘要:本研究聚焦于電穿孔儀電場參數對腫瘤不可逆電穿孔(IRE)的影響,通過一系列實驗優化電場強度、脈沖寬度和脈沖次數等關鍵參數,以提高腫瘤消融效率并減少正常組織損傷。實驗結果顯示,在特定電場參數下,腫瘤消融效果好,為腫瘤治療提供了一種新的精準、高效手段。引言腫瘤治療一直是臨床醫學的重要挑戰。傳統治療方式如手術切除、放療和化療雖有一定療效,但存在諸多局限。手術切除受限于腫瘤部位和大小,放療易引發正常組織損傷,化療則因缺乏特異性導致全身性毒副作用。不可逆電穿孔(IRE)作為一種新...
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摘要:本研究旨在構建人P2X7基因的真核表達載體,并通過轉染獲得穩定表達P2X7分子的HEK293細胞株。以人腦組織P2X7cDNA為模板擴增出P2X7基因,插入到真核表達載體pEGFP-N1中,構建重組質粒pEGFP-N1/P2X7。通過G418輔助熒光篩選,成功建立了穩定表達P2X7-EGFP的HEK293細胞系。該細胞系的建立為進一步研究P2X7離子通道的結構和功能奠定了堅實基礎。引言P2X7受體是嘌呤能受體家族中的一種重要成員,屬于配體門控離子通道受體。P2X7受體被...
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摘要本文旨在探討電轉法(電穿孔法)在修飾的信使核糖核酸(modRNA)細胞轉染中的應用效果及相關特性。通過優化電轉參數,實現了在HEK293和HeLa細胞系中高效的modRNA轉染,并評估了轉染效率、細胞活力及基因表達水平。本研究為modRNA在基因功能研究、細胞治療等領域的進一步應用提供了實驗基礎。引言在現代分子生物學與細胞生物學研究領域,將外源核酸分子高效地導入細胞內是一項極為關鍵的技術手段。其中,modRNA修飾技術的出現為基因表達調控、疾病治療等多方面研究開辟了新的途...
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摘要為了建立穩定表達谷胱甘肽過氧化物酶6(Glutathioneperoxidase6,GPx6)的真核表達細胞系,本研究對GPx6進行基因克隆,構建了慢病毒表達載體,并成功建立了表達豬源GPx6的CHO-K1細胞系。該研究成果為GPx6在豬繁殖力提高和精液稀釋液添加劑的應用提供了新思路。引言谷胱甘肽過氧化物酶6(GPx6)作為抗氧化酶家族的重要成員,在生物體內具有抗氧化和細胞保護的作用。近年來,GPx6在生殖健康領域的研究逐漸增多,尤其是在豬繁殖力提高方面展現出潛在的應用價...
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摘要:本研究旨在探討肝細胞生長因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)基因通過腎臟電轉染方法對大鼠腎缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusioninjury,IRI)的保護作用。通過構建hHGF基因表達載體,并利用威尼德電轉染系統將其導入大鼠腎臟,觀察其對腎功能、組織學改變及細胞凋亡的影響。結果表明,hHGF基因電轉染能有效減輕腎缺血再灌注損傷,為腎保護提供新的策略。引言腎缺血再灌注損傷是臨床腎臟移植、腎臟部分切除術及主動脈瘤手術等過程中的常見...
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摘要本研究旨在探討山羊精子電穿孔轉染外源DNA的最適條件,并評估其對精子活力和轉染效率的影響。通過優化電場強度、電擊時間和電擊次數等參數,確定了山羊精子電穿孔轉染外源DNA的最佳條件。實驗結果顯示,在400V、200μs條件下電擊一次,精子活力和轉染效率顯著提高,為生產轉基因山羊奠定了基礎。引言基因轉移技術是現代生物技術的重要組成部分,尤其在動物轉基因領域具有廣泛應用。精子介導的基因轉移因其操作簡便、成本低廉而受到廣泛關注。其中,電穿孔法作為一種高效的物理方法,能夠通過產生暫...
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摘要:本研究成功構建了基于重組酶的大豆基因定點編輯系統,通過結合CRISPR/Cas9系統和重組酶技術,顯著提高了基因編輯的效率和精準度。實驗結果表明,該系統能有效實現大豆基因的定點突變,并減少了脫靶效應的發生。該系統為大豆遺傳改良和分子育種提供了新的技術手段,具有重要的理論和實踐意義。引言傳統的育種方法存在周期長、效率低的問題,且難以實現對特定基因的精準編輯。近年來,基因編輯技術,特別是CRISPR/Cas9系統的出現,為大豆遺傳改良提供了新的途徑。然而,CRISPR/Ca...