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摘要雙順反子表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)兩種功能基因的協(xié)同表達(dá)，并優(yōu)化細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分選流程。利用威尼德電穿孔儀完成高效轉(zhuǎn)染，結(jié)合熒光標(biāo)記與流式分選技術(shù)，驗(yàn)證載體在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雙順反子載體顯著提高共表達(dá)效率，為多基因功能研究提供可靠工具。引言雙順反子載體因其可同時表達(dá)多個基因的特性，在基因治療、信號通路研究及合成生物學(xué)領(lǐng)域備受關(guān)注。傳統(tǒng)單順反子載體需多次轉(zhuǎn)染或復(fù)雜拼接，效率低且穩(wěn)定性差。本研究旨在設(shè)計(jì)一種基于內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)（IRES）或自切割多肽（P2A）的雙順...

摘要cMet基因的siRNA慢病毒載體，并通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染篩選獲得高效抑制cMet表達(dá)的細(xì)胞模型。實(shí)驗(yàn)采用分子克隆技術(shù)設(shè)計(jì)特異性siRNA序列，利用威尼德電穿孔儀完成病毒包裝，經(jīng)熒光標(biāo)記篩選及Westernblot驗(yàn)證，成功獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。結(jié)果顯示，cMet蛋白表達(dá)顯著降低，為后續(xù)功能研究提供了可靠工具。引言cMet基因編碼的肝細(xì)胞生長因子受體（HGFR）在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及耐藥性中發(fā)揮關(guān)鍵作用。其異常激活與多種癌癥不良預(yù)后密切相關(guān)，因此靶向cMet的基因沉默技術(shù)成為研究熱點(diǎn)。...

摘要：分子克隆技術(shù)構(gòu)建人CD160基因過表達(dá)載體，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染HEK293T及Jurkat細(xì)胞系，篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。通過流式細(xì)胞術(shù)、CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)及Transwell遷移模型系統(tǒng)分析CD160對細(xì)胞增殖、凋亡及遷移能力的影響。結(jié)果顯示CD160過表達(dá)顯著抑制T淋巴細(xì)胞活化并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移，Westernblot證實(shí)其通過調(diào)控PI3K/AKT信號通路發(fā)揮作用，為免疫調(diào)控機(jī)制研究提供新模型。引言：CD160作為免疫球蛋白超家族成員，在T/B淋巴細(xì)胞表面特異性...

摘要蝎毒多肽對慢性粒細(xì)胞白血病（CML）細(xì)胞中BCR-ABL融合基因的抑制作用及其分子機(jī)制。通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)蝎毒多肽可顯著下調(diào)BCR-ABLmRNA及蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制增殖，其作用可能與調(diào)控PI3K/AKT信號通路相關(guān)。實(shí)驗(yàn)采用威尼德電穿孔儀、紫外交聯(lián)儀等設(shè)備，為靶向治療CML提供潛在策略。引言慢性粒細(xì)胞白血病（CML）是一種由BCR-ABL融合基因驅(qū)動的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，其異常激活的酪氨酸激酶活性導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控。目前，酪氨酸激酶抑制劑（T...

摘要基因表達(dá)譜芯片技術(shù)，系統(tǒng)分析β干擾素轉(zhuǎn)染人源細(xì)胞后反式調(diào)節(jié)基因的表達(dá)變化。通過威尼德電穿孔儀實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染，結(jié)合威尼德分子雜交儀完成基因表達(dá)譜檢測，篩選出差異表達(dá)基因并進(jìn)行功能富集分析。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明，β干擾素顯著調(diào)控多個參與免疫應(yīng)答和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的基因，為闡明其抗病毒及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供了新依據(jù)。引言β干擾素（IFN-β）是一類具有抗病毒、抗增殖及免疫調(diào)節(jié)功能的多效細(xì)胞因子，其生物學(xué)效應(yīng)主要通過激活JAK-STAT信號通路并誘導(dǎo)下游基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)。然而，β干擾素對細(xì)胞基因組的全局性...

摘要人巨細(xì)胞病毒（HCMV）基因重組質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染人成纖維細(xì)胞，結(jié)合熒光定量PCR、Westernblot及共聚焦顯微技術(shù)，系統(tǒng)分析HCMV在基因編輯細(xì)胞中的復(fù)制動態(tài)。結(jié)果顯示，HCMVIE2蛋白顯著調(diào)控病毒DNA合成，且宿主細(xì)胞NF-κB信號通路參與復(fù)制調(diào)控。HCMV致病機(jī)制提供了新視角。引言人巨細(xì)胞病毒（HCMV）是一種廣泛傳播的β-皰疹病毒，可引發(fā)免疫功能低下患者嚴(yán)重并發(fā)癥。其復(fù)制機(jī)制復(fù)雜，涉及病毒基因與宿主因子的多重互作。近年研究表明，病毒立即早期蛋白（...

摘要白蛋白微泡的理化特性，系統(tǒng)探討其介導(dǎo)心肌細(xì)胞報告基因轉(zhuǎn)染的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)利用威尼德電穿孔儀制備微泡載體，結(jié)合某試劑構(gòu)建熒光素酶報告質(zhì)粒，分析不同參數(shù)對轉(zhuǎn)染效率的影響。結(jié)果表明，微泡粒徑與聲場強(qiáng)度的協(xié)同作用顯著提升基因遞送效率，為心肌細(xì)胞靶向治療提供了新思路。引言心肌細(xì)胞再生能力有限，基因治療為其功能修復(fù)提供了潛在策略。然而，傳統(tǒng)病毒載體存在免疫原性風(fēng)險，非病毒遞送系統(tǒng)則面臨轉(zhuǎn)染效率低的技術(shù)瓶頸。白蛋白微泡因生物相容性優(yōu)異且可響應(yīng)超聲空化效應(yīng)釋放基因，逐漸成為研究熱點(diǎn)。既往研究...

摘要基因表達(dá)譜芯片技術(shù)篩選XTP4基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的差異表達(dá)基因。采用威尼德電穿孔儀構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型，提取RNA后利用威尼德紫外交聯(lián)儀和分子雜交儀進(jìn)行芯片雜交及信號檢測。共鑒定出327個顯著差異表達(dá)基因，涉及代謝調(diào)控和細(xì)胞周期通路。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為解析XTP4的分子機(jī)制提供了新依據(jù)。引言XTP4基因作為一類新型調(diào)控因子，在細(xì)胞增殖與凋亡中發(fā)揮關(guān)鍵作用，但其具體分子機(jī)制尚未明確。基因表達(dá)譜芯片技術(shù)因其高通量、高靈敏度的優(yōu)勢，已成為篩選差異表達(dá)基因的重要工具。目前，針對XTP4的轉(zhuǎn)染...